Cette Ligne directrice est conçue pour évaluer les effets d’une substance sur les microorganismes de boue activée de station d’épuration en mesurant le taux de respiration (oxydation du carbone et/ou de l’ammonium) par la consommation d’oxygène. Les résultats de l’essai peuvent servir d’indicateurs de concentrations non inhibitrices à utiliser dans les essais de biodégradation. L’essai permet de déterminer les valeurs CEx et ou CSEO pour la substance d’essai. L’inhibition de trois différentes consommations d’oxygène peut être déterminée: totale, hétérotrophique seulement, et celle due à la nitrification en absence et présence de N-allylthiourée, un inhibiteur spécifique de nitrification. Pour obtenir une CSEO et une CEx, il est recommandé d’utiliser 5 concentrations d’essai appartenant à une série géométrique avec 5 réplicats et 6 témoins. Dans chaque récipient d’essai, des mélanges d’essai contenant de l’eau, de l’eau usée reconstituée et la substance d’essai sont incubés à pH 7.5 ±0.5 et à une température de 20±2°C, sous aération forcée, pour maintenir la concentration en oxygène dissous au dessus de 60-70% de saturation. La consommation d’oxygène est mesurée après 3 heures d’exposition et des mesures supplémentaires de 30 minutes peuvent être ajoutées au cas où la substance soit dégradée rapidement.